Na síntese típica de DNA, RNA e ácidos nucleicos não naturais, a etapa de desproteção e acoplamento desempenha papéis cruciais.
A etapa de desproteção consiste em remover o grupo DMT no suporte sólido ou o grupo hidroxila 5' no nucleosídeo anterior com ácido orgânico e expor o grupo hidroxila para a etapa de acoplamento seguinte.O ácido tricloroacético a 3% em diclorometano ou tolueno é usado principalmente para realizar a etapa de desproteção.A concentração de ácido tricloroacético e o tempo de desprotecção (tempo de desbloqueio) dominam a pureza dos produtos finais.A baixa concentração e o tempo de desbloqueio insuficiente deixam o grupo DMT sem reagir, o que diminui o rendimento e aumenta as impurezas indesejadas.O longo tempo de desbloqueio pode levar à depurina das sequências sintetizadas, formando impurezas inesperadas.
A etapa de acoplamento é sensível ao teor de água dos solventes e à umidade do ar.A concentração de água na síntese deve ser inferior a 40 ppm, de preferência inferior a 25 ppm.Para manter a condição de síntese anidra, a síntese dos ácidos nucléicos deve ser realizada em ambiente de baixa umidade, por isso recomendamos ao nosso cliente a utilização doEquipamento dissolvido de amiditas, que pode dissolver a fosforamidita em pó ou oleosa em acetonitrila anidra para evitar o contato com o ar.
Como a dissolução de fosforamiditos é melhor em situações não hídricas e armadilhas moleculares para adsorver vestígios de água nos reagentes e amidita, é necessário preparar oArmadilhas Moleculares.Recomendamos subpeneira de 2 g para frascos de reagentes de 50-250ml, 5g para frascos de reagentes de 250-500ml, 10g para frascos de reagentes de 500-1000ml e 20g para frascos de reagentes de 1000-2000ml.
A dissolução dos fosforamiditos deve ser realizada sob atmosfera inerte, e a substituição dos reagentes ativadores e acetonitrila deve ser finalizada a tempo.Os reagentes de Capping e Oxidação devem ser usados o mais rápido possível, os reagentes abertos proporcionam menor prazo de validade e menos atividade durante a síntese.
Horário da postagem: 09/08/2022